實驗方法原理
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神經細胞的原代培養是盡量創造最適合于各類神經細胞生長的體外環境，獲得狀態良好，純度較高細胞的方法。腦部組織來源的各種神經細胞的培養具有相似的取材過程和部分通用的培養條件。
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實驗材料
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動物組織?
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試劑、試劑盒
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消化液(0.25%胰蛋白酶+0.04%的EDTA)
完全培養基(DMEM+10%胎牛血清＋雙抗）
D-PBS液?
多聚賴氨酸（包被濃度100μg/ml)?
滅菌超純水
75%酒精?
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實驗步驟
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除動物消毒以外，其他步驟都在超凈臺內進行 。
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1. 動物的消毒：根據培養細胞的類型和要求不同，常用胎鼠和新生鼠做神經細胞的培養。消毒方法分別如下 。
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(1) 孕鼠操作 孕鼠經戊巴比妥鈉麻醉后，以棉球蘸碘伏擦拭腹部毛皮消毒 。 擦拭從中心向外方向進行，可更換棉球 1- 2次，面積盡量大一些，包括整個腹部和外生殖器周圍 。 用第 1 套解剖器械打開動物腹腔，換第 2 套器械分離子宮并置于含冷 D PBS 的 100mm 玻璃皿中，再換第 3 套器械在每只胎鼠的間隔處剪開子宮并剝離出胎鼠 。
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(2) 仔鼠操作 仔鼠（新生 7d 以內）直接浸泡于冰的 75%酒精中， -20℃冰箱低溫消毒 10min 左右，動物失去知覺即可開始取材 。
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2. 皮層組織的分離：新生鼠使用眼科剪將動物斷頭，并用鑷子剝除頭部的皮膚 。在冰 D -PBS 液中沿顱骨人字縫從后向前剝離 。 一般左手持彎鑷，在動物兩眼處以適當力度固定； 右手持直鑷，完成剝除皮膚 、 骨骼以及分離組織等工作 。 在顯微鏡下利用精細器械分離皮層或海馬時，沿皮層邊緣以 45° 角小心劃開，并逐步使之剝離，轉移組織入盛有冰 D - PBS 液的 35mm 小皿中；然后用精細器械仔細去除每個皮層或海馬的腦膜（整個過程需要在低溫冰袋上完成） 。
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3.組織的分散；用管口較粗的彎頭滴管吸去帶有腦膜的 D - PBS, 盡最去除干凈液體并避免吸走組織；用虹膜剪將組織逐撮均勻剪成乳糜狀，使組織塊為 1mm3?的大小為宜 。 加入合適體積的消化液（一般蓋過組織塊并且可以隨意搖晃即可），并均勻分散組織，放入37°C 孵育箱中消化約 15min (每間隔 3 -5min 用手輕輕搖晃1次，動物胎齡越小，越容易分散，消化時間可相應縮短） 。
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來源：《神經生物學實用實驗技術》第四軍醫大學出版社
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